Количественный и качественный анализ популяций CD8⁺ и CD4⁺ Т-клеток селезёнки и костного мозга у лактирующих мышей

Цель: установить фенотип клеток адаптивного иммунитета в селезёнке и костном мозге у лактирующих мышей.

Материалы и методы. Исследования проводились на лактирующих мышах. Для опыта у животных отбирали селезёнку и костный мозг. Суспензию отдельных спленоцитов готовили путем измельчения селезенки. Костный мозг получали, промывая костномозговую полость шприцем с 1-2 мл сбалансированного солевого раствора. Фенотип клеток адаптивного иммунитета определяли с помощью набора флуорохромконъюгированных антител: CD4-PerCP-Cy5.5, CD8-PE/Cy7, CD62L-APC/ Cy7, CD44-BV510 (Biolegend, США), в присутствии реагента True Stain, содержащего антитела к CD16/CD32 (Biolegend, США) для блокировки неспецифического связывания антител. Сбор данных осуществляли на проточном цитометре CytoFlex (Beckman Coulter, США). Результаты анализировали в программе Kaluza Analysis 2.1 (Beckman Coulter, США).

Результаты. В результате исследования установлено, что CD8⁺ T-клеток эффекторной (T_EM) и центральной памяти (T_CM) в 2,2 раза больше в красном костном мозге, тогда как в селезёнке преобладают все субпопуляции CD4⁺ Т-клеток памяти (T_CM; T_EM; T_NV). Содержание субпопуляции CD8⁺ Т-клеток наивной памяти (T_NV) в костном мозге и селезёнке было почти одинаковым и составило 52,57±1,58 % и 57,40±2,63 %, соответственно. Установлено достоверно низкое содержание (р<0,001) популяций СД8⁺ Т- клеток эффекторной памяти (T_EM; CD44⁺CD62L^-) в селезёнке 4,9±1,39 % по сравнению с Т-клетками (T_EM; CD44⁺CD62L^-) красного костного мозга 11,04±2,58 %.

Заключение. Популяция CD4⁺Т-клеток эффекторной памяти (Т_EM) в большом количестве аккумулируется в селезёнке, чтобы в дальнейшем ответить клеточным или гуморальным механизмом в ответ на проникновение в организм антигена. Костный мозг количественно и качественно превосходит селезенку по накоплению и размещению CD8⁺ Т-клеток эффекторной (T_EM) и центральной памяти (T_CM), которые отвечают за иммунологическую память и адаптивный иммунный ответ.

1. Bianco P. Bone and the hematopoietic niche: a tale of two stem cells / P. Bianco // Blood. – 2011. – № 117. – Р. 5281-5289. doi:10.1182/blood-2011-01-315069

2. Feuerer M. Bone marrow as a priming site for T-cell responses to blood-borne antigen / M. Feuerer, P. Beckhove et al. // Nat Med. – 2003. – №9. – Р. 1151-1157. doi:10.1038/nm9147.

3. Mazo I. B. Bone marrow is a major reservoir and site of recruitment for central memory CD8+ T cells / I. B. Mazo, M. Honczarenko et al. // Immunity. – 2005. – № 22. – Р. 259-270. doi:10.1016/j.immuni.2005.01.008.

4. Tokoyoda K. Professional memory CD4+ T lymphocytes preferentially reside and rest in the bone marrow / K. Tokoyoda, S. Zehentmeier et al. // Immunity. – 2009. – № 30. – 721-730. doi:10.1016/j.immuni.2009.03.015.

5. Lodolce J. P. IL-15 receptor maintains lymphoid homeostasis by supporting lymphocyte homing and proliferation / J. P. Lodolce, D. L. Boone et al. / Immunity. – 1998. – № 9. – Р. 669-676. doi: 10.1016/S1074-7613(00)80664-0.

6. Snell L. M. IL-15-dependent upregulation of GITR on CD8 memory phenotype T cells in the bone marrow relative to spleen and lymph node suggests the bone marrow as a site of superior bioavailability of IL-15 / L. M. Snell, G. H.Y. Lin, T. H. Watts // J Immunol. – 2012. – № 188. – Р. 5915-5923. doi:10.4049/jimmunol.1103270.

7. Sercan A. О. Memory CD8+ T cells colocalize with IL-7+ stromal cells in bone marrow and rest in terms of proliferation and transcription / A. О. Sercan, S. Durlanik et al. // Eur J Immunol. – 2015. – № 45(4). – Р. 975-987. doi:10.1002/eji.201445295.

8. Di Rosa F. The bone marrow: a nest for migratory memory T cells / F. Di Rosa, R. Pabst // Trends Immunol. – 2005. – № 26. – Р. 360-366. doi:10.1016/j.it.2005.04.011.

9. Tokoyoda K. Signals controlling rest and reactivation of T helper memory lymphocytes in bone marrow / K. Tokoyoda, A. Radbruch // Cell Mol Life Sci. – 2012. – № 69. – 1609-1613. doi:10.1007/s00018-012-0969-6.

10. Скопичев В. Г. Иммунобиология молочной железы и молочная продуктивность / В. Г. Скопичев, В. Б. Прозоровский. – Beau Bassin: Lap Lambert Academic Publishing, 2018. – 328 с.

11. Panova N. A. A role for cellular immunity in early postpartum period / N. A. Panova, V. G. Skopichev // Medical Immunology (Russia). – 2021. – Vol. 23. – № 4. – P. 853-858.

12. Скопичев В. Г. Молоко: учеб. пособие / В. Г. Скопичев, Н. Н. Максимюк. - Санкт-Петербург: Проспект Науки, 2011. – 368 с.

13. Патент РФ № 2743345. – 2021 г. Способ оценки клеточного иммунитета при молозивном вскармливании животных. Авт.., Панова Н. А., Скопичев В. Г.

14. Weninger W. Migratory properties of naive, effector, and memory CD8(+) T cells / W. Weninger, M. A. Crowley, N. Manjunath, U. H. Von Andrian // J. Exp. Med. – 2001. – № 194. – 953-966. doi: 10.1084/jem.194.7.953.

15. Pogodaeva P. Cells of immune memory in mice in the colostrums / P. Pogodaeva, N. Panova, V. Skopichev et al. // Journal of the Reproduction in Domestic Animals. – 2019. – Vol. 54. – № 3. – P. 103.