Эффективность использования инозитола в криопротекторных средах для замораживания тканей постэмбриональных гонад самок Gallus gallus domecticus

Цель: определить эффективность протокола замораживания яичников суточных цыплят в зависимости от состава криопротекторной среды.
Материалы и методы. Для получения яичников суточных цыплят использовали породу кур русская белоснежная (n=30 шт.). Замораживали с использованием простого 2х этапного метода витрификации, с использованием криопротекторных сред на основе DPBS, содержащих диметилсульфоксид, этиленгликоль и сахарозу в качестве криопротекторов в контроле (среда А) и добавлением инозитола (0,5М) (среда Б) в опытной модификации криопротекторной среды. Оценку эффективности проводили после хранения in vitro при температуре -1960С в течение 30 дней по состоянию первичных фолликулов в гистологических образцах. Результаты. Получены данные по результатам оценки гистологических образцов по целостности оогоний в корковом слое оттаянных яичников: при использовании криопротекторной среды А количество морофологически целостных оогоний – 1,4 шт. в поле зрения (увеличение х400), что составляло 5,4 % от показателя нативных образцов; при использовании среды Б – 9,0 шт. оогоний (34,5 % от нативных).
Заключение. Создание криобанка долговременного хранения женских гамет класса птиц (Aves) является актуальным стратегическим решением проблемы по сохранению генетического разнообразия пород и видов. Эффективность замораживания тканей гонад зависит от выбранного возраста донора и протокола криоконсервации с учетом состава криопротекторных сред. Представленные данные доказывают эффективность протокола замораживания яичников суточных цыплят при использовании криопротекторной среды с содержанием полиола – инозитол (среда Б) позволяет сохранить значимый процент морфологических целостных тканевых структур яичника и, непосредственно, оогоний в нем.

1. Peris-Frau P. DNA integrity and viability of testicular cells from diverse wild species after slow freezing or vitrification / P. Peris-Frau, J. Benito-Blanco, E. Martínez-Nevado, A. Toledano-Díaz, C. Castaño, R. Velázquez, B. Pequeño, B. Martinez-Madrid, M. C. Esteso, J. Santiago-Moreno // Front. Vet. Sci. – 2023. – №. 9. – P. 1114695. doi: 10.3389/fvets.2022.1114695.

2. Silversides F. G. Cryoconservation of avian gonads in Canada / F. G. Silversides, M. C. Robertson, J. Liu // Poult. Sci. – 2013. – № 92(10). – P. 2613—2617. doi: 10.3382/ps.2013-03185.

3. Liu J. Novel needle-in-straw vitrification can effectively preserve the follicle morphology, viability, and vascularization of ovarian tissue in Japanese quail (Coturnix japonica) / J. Liu, K.M. Cheng, F.G. Silversides //Anim. Reprod. Sci. – 2012. – № 134(3—4). – P. 197—202.

4. Liu J. A simple vitrification method for cryobanking avian testicular tissue / J. Liu, K.M. Cheng, P.H. Purdy, F.G. Silversides // Poult. Sci. – 2012. – № 91(12). – P. 3209—3213. doi: 10.3382/ps.2012-02454.

5. Liptoi K. Improvement of the application of gonadal tissue allotransplantation in the in vitro conservation of chicken genetic lines / K. Liptoi, K. Buda, E. Rohn, A. Drobnyak, E. E. Meleg, N. Palinkas-Bodzsar, B. Vegi, J. Barna // Anim. Reprod. Sci. – 2020. – № 213. – P. 106280. doi: 10.1016/j.anireprosci.2020.106280.

6. Fujihara M. Cryopreservation Competence of Chicken Oocytes as a Model of Endangered Wild Birds: Effects of Storage Time and Temperature on the Ovarian Follicle Survival / M. Fujihara, J.-i. Shiraishi, M. Onuma, Y. Ohta, M. Inoue-Murayama // Animals. – 2022. – № 12. – P. 1434. doi: 10.3390/ani12111434.

7. FAO, 2012. FAOSTAT. Food and Agriculture Organization of the United Nations [Электронный ресурс] https://www.fao.org/4/i3028e/i3028e.pdf (дата обращения: 10.04.2025)

8. Nateghi R. Ethylene Glycol and Dimethyl Sulfoxide Combination Reduces Cryoinjuries and Apoptotic Gene Expression in Vitrified Laying Hen Ovary / R. Nateghi, A. Alizadeh, Y. Jafari Ahangari, R. Fathi, A. Akhlaghi // Biopreserv. Biobank. – 2017. – № 15(6). P. – 519—528. doi: 10.1089/bio.2017.0078.

9. Pundir J. Inositol treatment of anovulation in women with polycystic ovary syndrome: a meta-analysis of randomised trials / J. Pundir, D. Psaroudakis, P. Savnur, P. Bhide, L. Sabatini, H. Teede, A. Coomarasamy, S. Thangaratinam // BJOG. – 2018. – № 125(3). – P. 299—308. doi: 10.1111/1471-0528.14754.

10. Unfer V. Effects of Inositol(s) in Women with PCOS: A Systematic Review of Randomized Controlled Trials / V. Unfer, J.E. Nestler, Z.A. Kamenov, N. Prapas, F. Facchinetti // Int. J. Endocrinol. – 2016. – P. 1849162. doi: 10.1155/2016/1849162.

11. Papaleo E. Myo-inositol may improve oocyte quality in intracytoplasmic sperm injection cycles. A prospective, controlled, randomized trial / E. Papaleo, V. Unfer, J.P. Baillargeon, F. Fusi, F. Occhi, L. De Santis // Fertil. Steril. – 2009. – № 91(5). – P. 1750–1754. doi: 10.1016/j.fertnstert.2008.01.088.

12. Nestler J.E. Ovulatory and metabolic effects of D-chiro-inositol in the polycystic ovary syndrome / J. E. Nestler, D. J. Jakubowicz et al. // N. Engl. J. Med. – 1999. – № 340(17). – P. 1314–1320. doi: 10.1056/NEJM199904293401703.

13. Colazingari S. The combined therapy myo-inositol plus D-chiro-inositol, rather than D-chiro-inositol, is able to improve IVF outcomes: results from a randomized controlled trial / S. Colazingari, M. Treglia, R. Najjar, A. Bevilacqua // Arch. Gynecol. Obstet. – 2013. – № 288(6). – P. 1405–1411. doi: 10.1007/s00404-013-2855-3.

14. Mohammadi S. The effect of Myo-inositol on fertility rates in poor ovarian responder in women undergoing assisted reproductive technique: a randomized clinical trial / S. Mohammadi, F. Eini et al. // Reprod. Biol. Endocrinol. – 2021. – № 19(1). – P. 61. doi: 10.1186/s12958-021-00741-0.

15. Liu J. A model for cryobanking female germplasm in Japanese quail (Coturnix japonica) / J. Liu et al. // Poult. Sci. – 2013. – № 92(10). – P. 2772—2775. doi: 10.3382/ps.2013-03292.

16. González-Morán M.G. Histological and stereological changes in growing and regressing chicken ovaries during development. / M.G. González-Morán // Anat. Rec. (Hoboken). – 2011. – Vol. 294(5). – P. 893—904. doi: 10.1002/ar.21364.

17. Fujihara M. Vitrification of canine ovarian tissues with polyvinylpyrrolidone preserves the survival and developmental capacity of primordial follicles / M. Fujihara, T. Kaneko, M. Inoue-Murayama // Sci. Rep. – 2019. – № 9. – P. 3970. doi: 10.1038/s41598-019-40711-6).

18. Liu J. Microscopic Morphology and Apoptosis of Ovarian Tissue after Cryopreservation using a Vitrification Method in Post-Hatching Turkey Poults, Meleagris gallopavo. / J. Liu, T. H. Elsasser, J.A. Long // J. Poult. Sci. – 2017. – № 54(4). — P. 303—311. doi: 10.2141/jpsa.0170033.

19. Hall G.B. Germ cell dynamics during nest breakdown and formation of the primordial follicle pool in the domestic turkey (Meleagris gallopavo) / G.B. Hall, J.A. Long, B.J. Wood, G.Y. Bedecarrats // Poult. Sci. – 2020. – № 99(5). – P. 2746—2756. doi: 10.1016/j.psj.2019.12.050.

20. Agca Y. Cryopreservation of Oocyte and Ovarian Tissue / Y. Agca // ILAR J. – 2000. – № 41(4). – P. 207–220. doi: 10.1093/ilar.41.4.207.