Медовый разбавитель для криоконсервации спермы трутней медоносной пчелы

Проведено предварительное испытание двух вариантов медового разбавителя П. П. Печникова и П. Н. Скаткина для криоконсервации спермы трутней медоносной пчелы. Первый вариант: мед 10% — 50 мл, лактоза — 10 мг, сахароза 10 мг, яичный желток — 2,5 мл, глицерин 3% — 6 мл 250 мкл. Во втором варианте глицерин заменен на ДМСО 10% в объеме 5 мл. 10%-ый рабочий раствор меда готовили на деионизированной воде по методике П. П. Печникова и П. Н. Скаткина на основе меда с белой акации.

В криопробирку Nunc объемом 1,8 мл добавляли 80 мкл свежеприготовленного разбавителя, затем 10 мкл спермы и все перемешивали. Приготовленные таким образом образцы помещали в визотубы, которые, в свою очередь, опускали в сосуд с водой комнатной температуры (24–26°С). После чего этот сосуд размещали в холодильнике на 2 ч при 3°С для эквилибрации. Срок криохранения составил одни сутки.

Оттаивание образцов проводили на водяной бане при 37°С в течение 1 мин. После оттаивания в образец добавляли 1 мл разбавителя, нагретого до 37°С, тщательно пипетировали и оставляли на 5–10 мин. Затем проводили однократное центрифугирование в течение 3 мин при 3000 об. После центрифугирования снимали супернатант и с помощью капилляра блока-шприца для ио маток набирали сперму со дна криопробирки.

Результаты анализа показали, что наиболее оптимальным вариантом для искусственного осеменения пчелиных маток является вариант с ДМСО. Применяли однократное осеменение объемом вводимой спермы 8–10 мкл. Для осеменения использовали неплодных маток в возрасте 7–8 сут. Учет печатного расплода проводили посредством прямого подсчета количества пчелиных и трутневых ячеек.

Установлено, что натуральный пчелиный мед с акации белой проявил свойства криопротектора, что в сочетании с яичным желтком и ДМСО позволило получить расплод рабочих пчел более 50%.

1. Гулов А. Н. Влияние синтетических сред, яичного желтка и пчелиного меда на криоустойчивость спермы трутней / А. Н. Гулов, З. Н. Сайфутдинова, Д. В. Митрофанов, И. А. Языков // Генетика и разведение животных. – 2020. – №1. – С. 27-36.

2. Hopkins B. K. Sequential generations of honey bee (Apis mellifera) queens produced using cryopreserved semen / B. K. Hopkins, C. Herr, W. S. Sheppard // Reproduction, Fertility and Development. – 2012. – V. 24. – Р. 1079-1083.

3. Jerez-Ebensperger R. The combined use of honey, garlic (Allium Sativum L.) and skimmed milk as an extender for chilling sheep semen / R. Jerez-Ebensperger, L. Gil1, N. Gonzalez, I. De Blas // CryoLetters. – 2015. – V. 36 (4). – P. 243-251.

4. Malik A., Subtitusi Madu Asli Pengganti Gliserol dalam Pembekuan pada Kualitas Pasca-thawing Spermatozoa Sapi Bali / A. Malik, R. Fauzi, M. I. Zakir // Acta veterinaria indonesiana. – 2017. – V. 5(2). – P. 98-104.

5. Kedzierska-Matysek M. Effect of freezing and room temperatures storage for 18 months on quality of raw rapeseed honey (Brassica napus) / M. Kedzierska-Matysek, M. Florek et al. // J. Food Sci Technol. – 2016. – V. 53(8). – P. 3349-3355.

6. Kantor Z. Glass Transition Temperature of Honey as a Function of Water Content As Determined by Differential Scanning Calorimetry / Z. Kantor et al. // J. Agric. Food Chem. – 1999. – V. 47. – P. 2327-2330.

7. Гулов А. Н. Проблемы сохранения генетических ресурсов медоносной пчелы / А. Н. Гулов // Пчеловодство. – 2018. – №6. – С. 22-25.

8. Пинаев Г. П. Методы культивирования клеток / Г. П. Пинаев, М. С. Богданова // Изд-во Политехн. ун-та, СПб., 2008. – 278 с.

9. Науменкова В. А. Сравнительная оценка определения целостности мембран спермиев жеребцов различными методами / В. А. Науменкова, М. М. Атрощенко, А. Н. Гулов, О. В. Широкова, Н. А. Фролова // Российская с/х наука. – 2020. – №3. – С.45-48.